本文目录一览

1，pcr纯化试剂盒和胶回收试剂盒有什么区别

两者的区别应该在于回收柱上面的滤芯（亲和柱）对目标DNA分子的吸附力以及透过率相关。一般情况下PCR纯化试剂盒需要收集的DNA分子片段较小。
不是的，pcr纯化试剂盒—是直接水溶解的pac产物就可以回收，回收效率高，但是只适合单一条带需要纯化测序的时候使用。pcr凝胶试剂盒—是在pcr产物是混合物，有多条杂带的情况下，先跑胶将杂带分离，然后在将你所要的条带位置的胶切下回收，后者的回收效率低，但是很纯净。古朵生物 纯化试剂盒

pcr纯化试剂盒和胶回收试剂盒有什么区别

2，凝胶回收试剂盒过期了还可以用吗

凝胶回收试剂盒常温干燥保存，复检期为一年。可以试下还能不能用。但如果过保质期的时间过长或者保存不当的话不建议使用。
融胶液，可以使琼脂糖凝胶完全融化。同时采用了一种新型的离子交换柱，在特定条件下，使dna能在离心过柱的瞬间，结合到dna纯化柱上，在一定条件下又能将dna充分洗脱，从而实现dna的快速纯化。1.低熔点琼脂糖挖块法：在琼脂糖主链导入羟乙基修饰后，其凝固点温度降为30度，熔化温度为65度，这一温度低于绝大多数双链dna的变性温度，利用这类凝胶纯度高熔点低的特点，在水平式琼脂糖凝胶电泳上，使所需的目的dna片段转移到低熔点琼脂糖凝胶内，经65度水浴5-10分钟，使之溶化，用饱和酚抽提，就可以分离到所需dna.2.玻璃棉离心法：利用玻璃棉为支持介质，通过离心，使含有目的基因dna片段的溶液从凝胶中析出，经离心管底部的小孔流入套管，再用酚纯化、乙醇沉淀，获得所需的目的基因片段。3.透析袋电泳法：与常规琼脂糖电泳原理相同，将含有目的基因片段的凝胶切下来，装入透析袋中，同时装入电泳缓冲液，再按常规电泳方法电泳，让dna在透析袋内走出凝胶块，再纯化缓冲液中的dna片段。4.deae纤维素纸片回收法：将这种纸片插入到琼脂糖凝胶，其位置正好在回收的dna条带的前方，使dna向纸片方向泳动并吸附在纸片上，然后把纸片取出再用洗脱液洗脱吸附的dna

凝胶回收试剂盒过期了还可以用吗

3，用什么凝胶回收试剂盒可以高效回收大片段DNA

融胶液，可以使琼脂糖凝胶完全融化。同时采用了一种新型的离子交换柱，在特定条件下，使DNA能在离心过柱的瞬间，结合到DNA纯化柱上，在一定条件下又能将DNA充分洗脱，从而实现DNA的快速纯化。1.低熔点琼脂糖挖块法：在琼脂糖主链导入羟乙基修饰后，其凝固点温度降为30度，熔化温度为65度，这一温度低于绝大多数双链DNA的变性温度，利用这类凝胶纯度高熔点低的特点，在水平式琼脂糖凝胶电泳上，使所需的目的DNA片段转移到低熔点琼脂糖凝胶内，经65度水浴5-10分钟，使之溶化，用饱和酚抽提，就可以分离到所需DNA.2.玻璃棉离心法：利用玻璃棉为支持介质，通过离心，使含有目的基因DNA片段的溶液从凝胶中析出，经离心管底部的小孔流入套管，再用酚纯化、乙醇沉淀，获得所需的目的基因片段。3.透析袋电泳法：与常规琼脂糖电泳原理相同，将含有目的基因片段的凝胶切下来，装入透析袋中，同时装入电泳缓冲液，再按常规电泳方法电泳，让DNA在透析袋内走出凝胶块，再纯化缓冲液中的DNA片段。4.DEAE纤维素纸片回收法：将这种纸片插入到琼脂糖凝胶，其位置正好在回收的DNA条带的前方，使DNA向纸片方向泳动并吸附在纸片上，然后把纸片取出再用洗脱液洗脱吸附的DNA
用凝胶回收试剂盒割胶回收小片段dna忘了加异丙醇有没有影响异丙醇用于沉淀dna...用异丙醇代替无水乙醇能更好地去除多糖的影响多糖的污染具体表现为有机溶剂沉淀时,沉淀很多,但复溶时,大量沉淀不溶,电泳观察时核酸含量很低影响不大,可用到0.6-1体积

用什么凝胶回收试剂盒可以高效回收大片段DNA

4，Takara胶回收试剂盒 说明书具体操作步骤

1. 琼脂糖凝胶电泳分离DNA片段,任何类型或等级的琼脂糖都可以使用.我们强烈的建议您使用新鲜的TAE Buffer作为电泳缓冲液.不要重复使用电泳缓冲液,因为会因其PH的升高而减少产量.新鲜的TBE也可以用,但只能得到较低的产量.　　2. 当所需DNA片段完全分离时,转移凝胶至紫外灯上,尽可能快地把所需的DNA片段切下来.　　注:切胶时尽量把多余的凝胶切去,DNA曝露在紫外灯下不能超过30秒.　　3. 将带有目的片段的凝胶块转移至1.5ml离心管(离心管已经称重了)中,称重得出凝胶块的重量.近似地确定其体积.假设其密度为1g/ml(几乎所有DNA凝胶的密度都可以近似为1g/ml),于是凝胶块的体积便可通过如下方法得到:凝胶薄片的重量为0.2g, 则其体积为　　0.2 ml.加入等体积的Binding Buffer(XP2),于55-65℃水浴中温浴7min或至凝胶完全融化,每2-3 min振荡或涡旋混合物.　　重要提醒:在凝胶完全溶解之后,注意凝胶-Binding buffer混和物的pH值.如果其pH值大于8的话,DNA的产量将大大减少.观察混和物的颜色,如果是橙色或红色,则要加入5 ul 浓度为5 M,pH为5.2的醋酸钠,以调低其pH值.经过这一调节,该混合物的颜色将恢复为正常的浅黄色.　　4. 取一个干净的HiBind DNA Mini柱子装在一个干净的2ml收集管内(已备好).　　5. 将第三步获得的DNA/熔胶液全部转移至柱子中.室温下10,000 x g离心1分钟.弃收集管中的滤液,将柱子套回2ml收集管内.　　6. 如果DNA/凝胶熔液的体积超过700ul,一次只能转移700ul至柱子中,余下的可继续重复第5步至所有的溶液都经过柱子.每一个Hibind DNA回收纯化柱都有一个极限为25gDNA的吸附能力.如果预期产量较大,则把样品分别加到合适数目的柱子中.　　7. 弃收集管中的滤液,将柱子套回2ml收集管内.移300ul Binding Buffer(XP2)至柱子中,室温下, 10,000 x g下离心1min.　　8. 弃收集管中的滤液,将柱子套回2ml收集管内.移700ul SPW Wash buffer(已用无水乙醇稀释的)至柱子中.室温下10,000xg离心1min.　　注意:浓缩的SPW Wash Buffer 在使用之前必须按标签的提示用乙醇稀释.如果DNA 洗涤缓冲液在使用之前是置于冰箱中的,须将其拿出置于室温下.　　9. 重复用700ul SPW Wash buffer洗涤柱子.室温下10,000xg离心1min.　　10. 弃收集管中的滤液,将柱子套回2ml收集管内.室温下,13,000 x g离心2 min以甩干柱子基质残余的液体.　　11. 把柱子装在一个干净的1.5ml离心管上,加入15~30ul(具体取决于预期的终产物浓度)的Elution Buffer(或TE缓冲液)到柱基质上,室温放置1min, 13,000xg离心1min以洗脱DNA.　　第一次洗脱可以洗出70-80%的结合DNA. 如果再洗脱一次的话,可以把残余的DNA洗脱出来,不过那样的浓度就会较低.

5，聚丙烯酰胺凝胶DNA回收试剂盒

以下是索莱宝的聚丙烯酰胺凝胶DNA回收试剂盒介绍（仅供参考）本试剂盒采用可以高效、专一结合DNA的硅基质材料和独特的缓冲液系统，从聚丙烯酰胺凝胶上回收DNA片段，同时除去蛋白质、其它有机化合物、无机盐离子及寡核苷酸引物等杂质。使用本试剂盒回收的DNA可适用于后续各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、文库筛选、连接和转化等实验。操作步骤：第一次使用前请先在15ml漂洗液中加入60ml无水乙醇，所有离心步骤均可使用台式离心机在室温下离心。1．将单一的目的DNA条带从聚丙烯酰胺凝胶中切下（尽量切除多余部分），放入1.5ml离心管中，称取重量，用研磨杵将胶尽量挤压碎。加入2倍体积的提取液吹打混匀（每100mg胶加入200ul提取液），75℃水浴30分钟。2．用1ml的去尖吸头吸取混合物至过滤柱中（将胶一起吸入，溶液过多时可分次加入），13,000rpm离心1分钟。将收集管中的滤出液转入新离心管中。3. 取6倍体积结合液加入原离心管中（每100mg胶加入600ul），清洗管壁后加入过滤柱中(溶液过多时可分次加入)，颠倒过滤柱或轻轻吹打几次混匀，13,000rpm离心1分钟。将所有收集的滤出液混合。4．将总滤出液混匀后加入吸附柱中（溶液过多时可分次加入），13,000rpm离心30-60秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放入收集管中。5．向吸附柱中加入600ul漂洗液（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），13,000rpm离心30-60秒，倒掉废液，将吸附柱重新放入收集管中。6．向吸附柱中加入600ul漂洗液，13,000rpm离心30-60秒，倒掉废液。7．将离心吸附柱放回收集管中，13,000rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液。将吸附柱开盖置于室温1-2分钟，彻底晾干，以防止残留的漂洗液影响下一步的实验。8．将吸附柱放到一个干净离心管中，向吸附膜中间位置悬空滴加适量65–70℃预热的洗脱缓冲液20-30ul，室温放置2分钟。13,000rpm离心2分钟收集DNA溶液。注意：①为了增加回收效率，可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，13,000rpm再次离心1分钟。②洗脱缓冲液体积不应少于20ul，体积过小影响回收效率。③洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5之间。9．DNA回收产物直接后续实验或者-20℃保存。
dna电泳一般使用的都是琼脂糖凝胶电泳，电泳的驱动力靠dna骨架本身的负电荷。 蛋白质电泳（一般指sds-page）一般使用的都是聚丙烯酰胺凝胶电泳，电泳的驱动力靠与蛋白质结合的sds上所携带的负电荷。 所以相同点就是样品都是带负电荷的，从负极向正极移动，移动的距离都和样品的分子量有关。而且这两个电泳体系可以互相交换使用。进行大分子蛋白质电泳时，可以考虑换用琼脂糖凝胶，因为该体系孔径大。相反，如果需要精确到各位数碱基的dna电泳也可以使用聚丙烯酰胺凝胶系统，因为使用该系统可以将相差一个碱基的两条dna链分开。 不同点首先是样品不同。这个就不用多说了。其次是结果的观察方法不同。dna电泳普遍使用eb做染料，在紫外灯下观察；而蛋白电泳使用的考马斯亮蓝染色，还需要经过脱色步骤，不过观察起来比较简单。还有就是胶体系的差别，dna电泳通常是一胶跑到底，而蛋白质电泳则会有分离胶和浓缩胶之区别。 电泳中样品移动的本质确实是样品所携带的电荷。但是，区分这些条带直接可以用分子量而无需使用电荷数，是因为这些样品的电荷/分子量比都是恒定的了。以dna分子为例，它在电泳中的移动是靠其骨架中磷酸所携带的负电荷来实现的，而这个磷酸分子又是每一个核苷酸中都有的，所以dna分子所携带的负电荷数是由其核苷酸总数决定的。而且，dna分子中核苷酸的组成动辄成百上千，在如此大的分子量面前，讨论单个核苷酸之间分子量的差别就显得毫无意义。这样，dna分子中负电荷的量就可以用dna的分子量来代替，反过来，dna的分子量也就可以用dna分子所携带的电荷来代替（一句话，dna分子的电荷/分子量比是恒定的）。 这在蛋白电泳中（特别是sds-page中）是一样的。在sds-page中，sds将蛋白质变性成直线分子并紧密包裹于其上，使得其所携带的电荷与蛋白分子量成了一定的比例，剩下的就和核酸电泳一样了。 至于为什么核酸的横着跑，蛋白竖着跑，个人认为最大的问题是蛋白制胶的过程导致的。蛋白制胶由于使用了两种不同的凝胶系统，所以需要一个水平的分界面。这个分界面在配胶的过程中是依靠异丙醇在重力作用下的压力下形成的。所以，一并就竖着跑了～～ 你也是搞生化的？

6，为什么dna回收试剂盒大于10kb回收不了

①切胶回收dna片段是要把整个目的片断所在位置的胶全部回收。所以为了减少胶的体积，我们 就可以用相对比较薄的胶来跑电泳，通常只要够点样即可，或是采用薄而宽的梳子来跑胶。这样可减少回收试剂引起的一些后续麻烦。②主要还是DNA的浓度, 如果DNA浓度不够, 想胶小点也不可能。③紫外灯下切下含待回收DNA的凝胶时，要衬以干净的塑料薄膜，使用无DNA污染的新刀片， 其目的在于防止外源DNA的污染。④利用凝胶回收试剂盒DNA回收效率较低或者未回收到目的片段可能有以下几个原因：胶块未完 全溶解，可适当延长水浴时间，并增加上下颠倒次数辅助溶解;胶块体积太大，应先将其切为小块，分多次回收;电泳缓冲液pH太高，硅基质膜在高盐低pH结合 DNA，如pH太高，应作适当调整;漂洗液中未加入无水乙醇。⑤可以改用去离子水洗脱。但是实验室所用纯水一般pH偏低，可利用NaOH适当调高其pH 值，以增加洗脱得率。⑥洗脱产物含有残留的乙醇会影响后续酶切实验，请确保彻底去除漂洗缓冲液，具体方法参见回收 效率低的解决方案。⑦不可以使用更小洗脱体积(小于说明书提供的最小洗脱体积)进行洗脱以提高浓度，因为说明书 提供的最少洗脱体积是能完全覆盖吸附膜的最小体积，若减少体积则不能将DNA完全洗脱下来。⑧电泳检测只有一条目的带，可以选用凝胶回收试剂盒。如果后续实验对片段纯度要求较高，建议 即使只有一条带，也可以切胶纯化，其回收得到片段的纯度可能要比直接回收高一些。⑨琼脂糖凝胶胶块不溶可能是下述原因：琼脂糖质量不好;含目的片段的凝胶再空气中放置过久， 使胶块失水、干燥，建议切胶后立即进行回收或将胶块保存在4℃或-20℃;制胶的电泳缓冲液浓度过高或陈旧。关于胶回收切胶的一点注意事项1. 电泳的buffer和gel都是新制的，切胶的台子清理干净，刀片最好洗净灭菌，总之一句话就是保证切下的带没有外源dna污染。2. 切胶是要把整个目的片断所在位置的胶全部回收。为了减少胶的体积，可以用相对比较薄的胶来做，只要够点样即可，也可采用薄而宽的梳子来跑胶。3. 关于防护，在一般有机玻璃后就足够了，戴上防护面具以保护眼睛，如果戴树脂眼镜就可以了。要是非常害怕紫外照射，或者对于胶有特殊要求，例如要求不含 EB，可以采用点marker和带刻度的尺子一起照相的方法来确定目的条带在胶上的位置进行切胶。4. 按照正常程序点marker跑胶，然后切下有marker的胶，EB染色，紫外灯下与带刻度的尺子一起照相。由于要回收的带与marker间的相对位置已 知，根据尺子来衡量未染色胶上目的带的位置即可。如果觉得很难判断，可以直接在marker边点少量的样，这样位置就容易确定了。
纯化DNA去除DNA溶液当中的酶类和蛋白质，经典的方法是使用氯仿抽提，或者是1:1的苯酚氯仿，或者是苯酚。两种有机溶剂混合使用要比使用单独的一种更好，因为这种方法非常有效的使蛋白质变性，酶类失活。然而，尽管苯酚可以有效的使蛋白变性，但是不能够抑制RNase的活性，而且其也是含有polyA的RNA的有效的溶剂，因此，可以通过使用两种有机溶剂同时使用的方法解决这一问题。注意：氯仿指的是24:1的氯仿异戊醇的混合物。苯酚指的是用0.1%的羟基喹啉和0.2%的贝塔巯基乙醇平衡的苯酚。1、将DNA溶液与等体积的苯酚氯仿混合2、混匀直到成为乳液状3、离心3分钟4、将上清液转移到干净的离心管中（注意不要吸取中间层）5、再重新用苯酚氯仿处理一次，即就是重复1、2、3、46、加入等体积的氯仿，混匀，重复2、3、47、用乙醇或者异丙醇沉淀注意：如果DNA片段大于10Kb，by gentle shaking。如果小于10Kb，by vortexing。如果大于10Kb，采用下列步骤:a. 20 rpm 缓慢摇匀。b. 使用大口径枪头转移DNA溶液c. 用乙醇沉淀DNA。d. 氯仿的去除可以通过透析，透析液用冷的TNE或者饱和的水。沉淀DNA最常用的是乙醇沉淀的方法。此过程是在低温（-20摄氏度）且适当的一价离子存在的情况下沉淀DNA。该方法快速且可以回收纳克级的DNA。1、确定DNA溶液的体积2、用pH8.0的水或者TE溶液调整DNA溶液中的一价离子的浓度，或者加入一定量的一价离子（见表）。浓度终浓度Sodium acetate 醋酸钠2.5 M（pH5.2）0.25 MSodium chloride 氯化钠5.0 M0.1 MAmmonium acetate 醋酸铵10.5 M2.0 M3、混匀后加入2倍体积的冷的无水乙醇，放置-20摄氏度。4、一般放置20-30分钟。如果片段小于1 Kb或者浓度非常低，可以适当延长时间或者放置-70摄氏度。5、0摄氏度离心。一般12000 rpm 离心10分钟足够。如果片度较小或者浓度较低则要延长离心时间和转速。6、去掉上清，使用吸水纸尽量吸干管中溶液，然后使用真空干燥机干燥。7、用pH8.0的水或者TE溶液溶解DNA沉淀。说明：A. 1倍体积的异丙醇通常用来代替2倍体积的无水乙醇。
你是做胶回收吧?低温会影响胶的溶解,室温加快DNA溶解于溶液,而且吸附柱在低温下结合DNA的效率也低,最后乙醇挥发也是在室温的效果更好

文章TAG：dna  凝胶  回收  试剂盒  dna凝胶回收试剂盒  
下一篇