dna胶回收，DNA胶回收回收率为什么与点样量和片段大小有关
来源：整理 编辑：皮来回收 2023-11-23 17:43:31
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1，DNA胶回收回收率为什么与点样量和片段大小有关
DNA片断越大，和固相基质的结合力越强，就越难洗脱，回收率就低；DNA的量越少，相对损失越大，回收率越低。
2，如何提高DNA胶回收的效率
DNA切胶后，加入3-4倍的溶胶液（注意不同的试剂盒加的不一样），带胶块完全溶解，然后慢慢加入1倍的异丙醇，边加边混匀，然后就加入到吸附柱中，后面的操作就按照试剂盒说明进行就可以了。
3，有谁知道PCR扩增中 什么是割胶回收 该怎么操作
将PCR的产物跑琼脂糖凝胶电泳，将目的产物的条带用刀片切下来，用一定的溶剂把胶溶解，然后回收溶液中的DNA片断，这个就是胶回收。至于具体的操作步骤和溶液，都有现成的试剂盒卖的。很多生物技术公司都做。比如，比较好的有TAKARA的。试剂都是配好的，有详细的操作步骤，按照那个来就可以了。只要有离心机和移液器就可以操作。
4，为什么DNA需要回收
如果你是指的切胶回收，是因为一个DNA样品中有可能混有多个不同大小的DNA片段，我们需要通过电泳将这些片段分离开，再将含有目的DNA片段的胶切下来回收其中的DNA片段，达到纯化的目的。dna回收的主要目的是为了去除杂质，得到更纯的dna目的片段，用来做后续的实验，（主要用来做连接）如果是除盐，换buffer体系的话做dna（peg，乙醇）做沉淀就好了，不需要做dna回收。
5，DNA为什么要回收
要回收的DNA说明是有用的。例如，通常经过酶切的DNA分子要进行凝胶电泳，将杂带和你要的条带区分看，并把你要的那部分回收，充分除盐，以进行后续的DNA连接等操作。再如，经过PCR扩建的基因片段也是要进行凝胶电泳并回收的。因为PCR的产物除了你要的基因片段之外，还有模板、primer、错配片段等不需要的基因片段，进行凝胶电泳可以将它们进行初步分离，之后回收你的PCR产物才能进行后续的分子实验。如果你是指的切胶回收，是因为一个dna样品中有可能混有多个不同大小的dna片段，我们需要通过电泳将这些片段分离开，再将含有目的dna片段的胶切下来回收其中的dna片段，达到纯化的目的。
6，为什么dna回收试剂盒大于10kb回收不了
纯化DNA去除DNA溶液当中的酶类和蛋白质，经典的方法是使用氯仿抽提，或者是1:1的苯酚氯仿，或者是苯酚。两种有机溶剂混合使用要比使用单独的一种更好，因为这种方法非常有效的使蛋白质变性，酶类失活。然而，尽管苯酚可以有效的使蛋白变性，但是不能够抑制RNase的活性，而且其也是含有polyA的RNA的有效的溶剂，因此，可以通过使用两种有机溶剂同时使用的方法解决这一问题。注意：氯仿指的是24:1的氯仿异戊醇的混合物。苯酚指的是用0.1%的羟基喹啉和0.2%的贝塔巯基乙醇平衡的苯酚。1、将DNA溶液与等体积的苯酚氯仿混合2、混匀直到成为乳液状3、离心3分钟4、将上清液转移到干净的离心管中（注意不要吸取中间层）5、再重新用苯酚氯仿处理一次，即就是重复1、2、3、46、加入等体积的氯仿，混匀，重复2、3、47、用乙醇或者异丙醇沉淀注意：如果DNA片段大于10Kb，by gentle shaking。如果小于10Kb，by vortexing。如果大于10Kb，采用下列步骤:a. 20 rpm 缓慢摇匀。b. 使用大口径枪头转移DNA溶液c. 用乙醇沉淀DNA。d. 氯仿的去除可以通过透析，透析液用冷的TNE或者饱和的水。沉淀DNA最常用的是乙醇沉淀的方法。此过程是在低温（-20摄氏度）且适当的一价离子存在的情况下沉淀DNA。该方法快速且可以回收纳克级的DNA。1、确定DNA溶液的体积2、用pH8.0的水或者TE溶液调整DNA溶液中的一价离子的浓度，或者加入一定量的一价离子（见表）。浓度终浓度Sodium acetate 醋酸钠2.5 M（pH5.2）0.25 MSodium chloride 氯化钠5.0 M0.1 MAmmonium acetate 醋酸铵10.5 M2.0 M3、混匀后加入2倍体积的冷的无水乙醇，放置-20摄氏度。4、一般放置20-30分钟。如果片段小于1 Kb或者浓度非常低，可以适当延长时间或者放置-70摄氏度。5、0摄氏度离心。一般12000 rpm 离心10分钟足够。如果片度较小或者浓度较低则要延长离心时间和转速。6、去掉上清，使用吸水纸尽量吸干管中溶液，然后使用真空干燥机干燥。7、用pH8.0的水或者TE溶液溶解DNA沉淀。说明：A. 1倍体积的异丙醇通常用来代替2倍体积的无水乙醇。你是做胶回收吧?低温会影响胶的溶解,室温加快DNA溶解于溶液,而且吸附柱在低温下结合DNA的效率也低,最后乙醇挥发也是在室温的效果更好①切胶回收dna片段是要把整个目的片断所在位置的胶全部回收。所以为了减少胶的体积，我们 就可以用相对比较薄的胶来跑电泳，通常只要够点样即可，或是采用薄而宽的梳子来跑胶。这样可减少回收试剂引起的一些后续麻烦。②主要还是DNA的浓度, 如果DNA浓度不够, 想胶小点也不可能。③紫外灯下切下含待回收DNA的凝胶时，要衬以干净的塑料薄膜，使用无DNA污染的新刀片， 其目的在于防止外源DNA的污染。④利用凝胶回收试剂盒DNA回收效率较低或者未回收到目的片段可能有以下几个原因：胶块未完 全溶解，可适当延长水浴时间，并增加上下颠倒次数辅助溶解;胶块体积太大，应先将其切为小块，分多次回收;电泳缓冲液pH太高，硅基质膜在高盐低pH结合 DNA，如pH太高，应作适当调整;漂洗液中未加入无水乙醇。⑤可以改用去离子水洗脱。但是实验室所用纯水一般pH偏低，可利用NaOH适当调高其pH 值，以增加洗脱得率。⑥洗脱产物含有残留的乙醇会影响后续酶切实验，请确保彻底去除漂洗缓冲液，具体方法参见回收 效率低的解决方案。⑦不可以使用更小洗脱体积(小于说明书提供的最小洗脱体积)进行洗脱以提高浓度，因为说明书 提供的最少洗脱体积是能完全覆盖吸附膜的最小体积，若减少体积则不能将DNA完全洗脱下来。⑧电泳检测只有一条目的带，可以选用凝胶回收试剂盒。如果后续实验对片段纯度要求较高，建议 即使只有一条带，也可以切胶纯化，其回收得到片段的纯度可能要比直接回收高一些。⑨琼脂糖凝胶胶块不溶可能是下述原因：琼脂糖质量不好;含目的片段的凝胶再空气中放置过久， 使胶块失水、干燥，建议切胶后立即进行回收或将胶块保存在4℃或-20℃;制胶的电泳缓冲液浓度过高或陈旧。关于胶回收切胶的一点注意事项1. 电泳的buffer和gel都是新制的，切胶的台子清理干净，刀片最好洗净灭菌，总之一句话就是保证切下的带没有外源dna污染。2. 切胶是要把整个目的片断所在位置的胶全部回收。为了减少胶的体积，可以用相对比较薄的胶来做，只要够点样即可，也可采用薄而宽的梳子来跑胶。3. 关于防护，在一般有机玻璃后就足够了，戴上防护面具以保护眼睛，如果戴树脂眼镜就可以了。要是非常害怕紫外照射，或者对于胶有特殊要求，例如要求不含 EB，可以采用点marker和带刻度的尺子一起照相的方法来确定目的条带在胶上的位置进行切胶。4. 按照正常程序点marker跑胶，然后切下有marker的胶，EB染色，紫外灯下与带刻度的尺子一起照相。由于要回收的带与marker间的相对位置已 知，根据尺子来衡量未染色胶上目的带的位置即可。如果觉得很难判断，可以直接在marker边点少量的样，这样位置就容易确定了。
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