本文目录一览

1,怎么回收pcr产物

1. 琼脂糖凝胶电泳回收,有相应试剂盒;2. 直接PCR过柱子回收,有相应试剂盒;3. 异丙醇/乙醇法回收。具体的protocol,如果你需要,我也可以发给你。
1. 琼脂糖凝胶电泳回收,有相应试剂盒;2. 直接pcr过柱子回收,有相应试剂盒;3. 异丙醇/乙醇法回收。具体的protocol,如果你需要,我也可以发给你。

怎么回收pcr产物

2,有谁知道PCR扩增中 什么是割胶回收 该怎么操作

将PCR的产物跑琼脂糖凝胶电泳,将目的产物的条带用刀片切下来,用一定的溶剂把胶溶解,然后回收溶液中的DNA片断,这个就是胶回收。至于具体的操作步骤和溶液,都有现成的试剂盒卖的。很多生物技术公司都做。比如,比较好的有TAKARA的。试剂都是配好的,有详细的操作步骤,按照那个来就可以了。只要有离心机和移液器就可以操作。
虽然我很聪明,但这么说真的难到我了

有谁知道PCR扩增中 什么是割胶回收 该怎么操作

3,怎样回收目的基因

回收?那就是已经克隆出来了?基于PCR的话,可以是扩增完了之后胶回收,胶回收的方法就比较多了,比如用特制的回收电泳槽将DNA跑出胶,或者用回收试剂盒等。还有一种方法就是直接纯化PCR产物,这个需要特殊的纯化试剂盒以除去PCR产物中的引物,酶和其他一些杂质。
关键字:电泳和凝胶回收dna片断 * 购买各种酶的时间和花费 * 筛选和鉴定重组子的时间和花费 新方法 简单的说,将目的基因按传统方法克隆到一个中间载体上,鉴定。将含目的基因的中间载体分别与配套的表达载体及一种特殊的酶混合保温,转化。http://www.ebiotrade.com/newsf/2001-3/l01316161740.htm

怎样回收目的基因

4,PCR扩增目的基因以后怎么用琼脂糖电泳回收及纯化呢希望高手指

可以用回收试剂盒。举例如下:DNA的回收使用AXYGEN公司AxyPrep DNA凝胶回收试剂盒,回收步骤如下:1、 在紫外灯下切下含有目的DNA的琼脂糖凝胶,用纸巾吸尽凝胶表面液体并切碎。计算凝胶重量(提前记录1.5 ml离心管重量),该重量作为一个凝胶体积(如100 mg=100 μl体积);2、 加入3个凝胶体积的Buffer DE-A,混合均匀后于75 ℃加热,,间断混合(每2-3 min),直至凝胶块完全融化(约6-8 min);3、 加0.5个Buffer DE-B,混合均匀;4、 吸取步骤3中混合液,转移到DNA制备管(置于2 ml( 试剂盒内提供)离心管)中,12,000×g离心1 min,弃滤液;5、 将制备管置回2 ml离心管,加500 μlBuffer W1,12,000×g离心30 s,弃滤液;6、 将制备管置回2 ml离心管,加500 μlBuffer W2,12,000×g离心30 s,弃滤液,用同样的方法再用700 μl Buffer W2洗涤一次12,000×g离心1 min;7、 将制备管置回2 ml离心管,12,000×g离心1 min;8、 将制备管置于洁净的1.5 ml离心管(试剂盒内提供)中,在制备膜中央加25-30 μlEluent,室温静置1 min,12,000×g离心1 min洗脱DNA。 如果片段较大,如几千kb以上建议用promega公司的回收试剂盒这样效果较好。具体的步骤什么的回收试剂盒里均有说明书。
一般购买纯化试剂盒进行纯化。以Takara公司的试剂盒为例:1. 使用TAE缓冲液或TBE缓冲液制作琼脂糖凝胶,然后对目的DNA进行琼脂糖凝胶电泳。2. 在紫外灯下切出含有目的DNA的琼脂糖凝胶,用纸巾吸尽凝胶表面的液体。此时应注意尽量切除不含目的DNA部分的凝胶,尽量减小凝胶体积,提高DNA回收率。注)切胶时请注意不要将DNA长时间暴露于紫外灯下,以防止DNA损伤。3. 切碎胶块。胶块切碎后可以加快胶块融化时间,提高DNA的回收率。4. 称量胶块重量,计算胶块体积。计算胶块体积时,以1 mg=1 μl进行计算。5. 向胶块中加入胶块融化液DR-I Buffer,DR-I Buffer的加量如下表:凝胶浓度DR-I Buffer使用量1.0%3个凝胶体积量1.0%~1.5%4个凝胶体积量1.5%~2.0%5个凝胶体积量6. 均匀混合后75℃加热融化胶块(低熔点琼脂糖凝胶只需在45℃加热)。此时应间断振荡混合,使胶块充分融化(约6~10分钟)。注)胶块一定要充分融化,否则将会严重影响DNA的回收率。7. 向上述胶块融化液中加入DR-I Buffer量的1/2体积量的DR-II Buffer,均匀混合。当分离小于400 bp的DNA片段时,应在此溶液中再加入终浓度为20%的异丙醇。8. 将试剂盒中的Spin Column安置于Collection Tube上。9. 将上述操作7的溶液转移至Spin Column中,12,000 rpm离心1分钟,弃滤液。注)如将滤液再加入Spin Column中离心一次,可以提高DNA的回收率。10. 将500 μl的Rinse A加入Spin Column中,12,000 rpm离心30秒钟,弃滤液。11. 将700 μl的Rinse B加入Spin Column中,12,000 rpm离心30秒钟,弃滤液。注)请确认Rinse B中已经加入了指定体积的100%乙醇。12. 重复操作步骤11。13. 将Spin Column安置于Collection Tube上,12,000 rpm离心1分钟。14. 将Spin Column安置于新的1.5 ml的离心管上,在Spin Column膜的中央处加入25 μl的灭菌蒸馏水或Elution Buffer,室温静置1分钟。注)把灭菌蒸馏水或Elution Buffer加热至60℃使用时有利于提高洗脱效率。15. 12,000 rpm离心1分钟洗脱DNA。
阴性对照的actin可能是从旁边的加样孔漏过去的,也可能是加样的时候没换枪头带过去的,不要太在意这个阴性对照。  gene1结果似乎不错,至少阴性对照比actin好,不过好像也漏过去一些。  gene2的pcr条件需要优化一下,或者你的样本里本来就不表达,也许需要一个阳性对照。
一般都是用试剂盒的,里面有说明书,你一看就明白了,

文章TAG:产物  回收  怎么  pcr  pcr产物回收怎么做  
下一篇